Jakich rękawiczek jednorazowych należy używać podczas ekstrakcji RNA przy użyciu TRIzol®?
RNA odgrywa kluczową rolę w ekspresji genów, pełniąc funkcję pośrednika między DNA a białkami. Ekstrakcja DNA, RNA i białek jest kluczowym etapem w badaniach genetyki molekularnej. Noszenie odpowiedniego sprzętu ochrony osobistej (PPE) podczas ekstrakcji RNA jest niezbędne, aby uniknąć zanieczyszczenia rybonukleazą, która mogłaby zafałszować wyniki. Ponadto metody ekstrakcji często wymagają użycia rozpuszczalników organicznych. W zależności od stosowanej metody ekstrakcji, dobór odpowiednich rękawic laboratoryjnych jest kluczowy, a w szczególności rękawic zapewniających najlepszą odporność na stosowane substancje chemiczne. Dlatego tak ważny jest staranny dobór rękawic jednorazowych, które nosi się podczas ekstrakcji RNA za pomocą TRIzolu® lub podobnych odczynników.
Jaka jest najpopularniejsza metoda ekstrakcji RNA?
Metoda ekstrakcji z zastosowaniem tiocyjanianu guanidyniowego, fenolu i chloroformu jest powszechnie stosowana w biologii molekularnej do izolowania RNA (a czasami DNA i białek) z różnych próbek (tkanek ludzkich/zwierzęcych, roślin, drożdży, bakterii).
Od czasu opublikowania w 1987 roku metody Chomczyńskiego-Sacchiego (źródło: Chomczyński – Sacchi – 1987. „Jednoetapowa metoda izolacji RNA poprzez ekstrakcję kwasem tiocyjanianu guanidyny, fenolu i chloroformu.” https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2440339/ ), metoda ta stała się metodą referencyjną. Chociaż obecnie istnieje wiele alternatywnych metod, takich jak zestawy do ekstrakcji, wielu użytkowników nadal preferuje tę ręczną.
Kilka firm sprzedaje odczynniki do tego procesu ekstrakcji pod różnymi nazwami handlowymi, takimi jak TRIzol® (Invitrogen), TRI Reagent® (Molecular Research Center), QIAzol® (Qiagen), NucleoZOL (Macherey-Nagel), RNA Extracol (Eurx) i inne.
Protokół ekstrakcji tiocyjanianem guanidyniowym, fenolem i chloroformem pozwala na jednoczesne rozpuszczenie białek, lipidów i kwasów nukleinowych przy jednoczesnym zachowaniu integralności RNA. Główną zaletą tej metody jest możliwość jednoczesnej izolacji RNA, DNA i białek z tej samej próbki poprzez prostą modyfikację fazy odzyskiwania. Jednak głównym wyzwaniem jest radzenie sobie z toksycznymi i lotnymi odczynnikami stosowanymi w tym procesie.
Jakie zagrożenia niosą ze sobą odczynniki stosowane do ekstrakcji RNA?
W tym artykule odnosimy się konkretnie do „TRIzolu®” — komercyjnego roztworu stosowanego w naszych testach odporności chemicznej rękawic laboratoryjnych (przenikanie substancji chemicznych).
Wszystkie te odczynniki składają się z mieszaniny fenolu (rozpuszczalnika) i tiocyjanianu guanidyniowego (czynnika chaotropowego).
Odczynniki te są oznaczone różnymi ostrzeżeniami i symbolami dotyczącymi zagrożeń zgodnie z rozporządzeniem (WE) nr 1272/2008 w sprawie klasyfikacji, oznakowania i pakowania substancji i mieszanin (rozporządzenie CLP):
W skład tych odczynników wchodzą:
- Fenol: Związek silnie żrący dla skóry i oczu, toksyczny w przypadku wdychania, połknięcia i kontaktu ze skórą. Może powodować poważne oparzenia i obrażenia.
- Tiocyjanian guanidyniowy: Działa żrąco na skórę i oczy, toksycznie w przypadku wdychania, połknięcia i kontaktu ze skórą, może powodować podrażnienia i oparzenia.
Podczas pracy z tymi odczynnikami pod wyciągiem, aby uniknąć narażenia na toksyczne opary, użytkownicy są narażeni na ryzyko chemiczne, szczególnie w przypadku kontaktu ze skórą.
Pracownicy laboratorium zazwyczaj obsługują opakowania komercyjne (100–200 ml), co wiąże się z ryzykiem przypadkowego rozlania. Podczas fazy przetwarzania próbek, operatorzy są również narażeni na działanie TRIzolu® (mikropipetowanie, wirowanie próbek, otwieranie/zamykanie mikroprobówek, mielenie próbek itp.).
Dlatego też niezwykle ważne jest zapewnienie stosowania odpowiedniego sprzętu ochrony osobistej (PPE), takiego jak laboratoryjne , podczas pracy z tymi substancjami chemicznymi.
Które rękawiczki jednorazowe nadają się do obsługi odczynników do ekstrakcji RNA?
Biorąc pod uwagę substancje chemiczne, noszenie odpowiednich rękawiczek jednorazowych jest niezwykle ważne. Operatorzy powinni ocenić, czy rękawice, które zazwyczaj noszą podczas tych zadań, nadają się do pracy z tymi odczynnikami.
Należy priorytetowo traktować jednorazowe rękawiczki nitrylowe lub nitrylowo-neoprenowe zamiast rękawiczek z lateksu naturalnego. Rękawiczki nitrylowe są rzeczywiście bardziej odporne na rozpuszczalniki organiczne.
SHIELDskin SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™, SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260 i SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 300oraz ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250 szczególnie dobrze nadają się do ochrony przed zachlapaniem podczas pracy z odczynnikami do ekstrakcji RNA.
Testy przenikania substancji chemicznych z użyciem TRIzolu® na tych rękawicach dały następujące wyniki:
- ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF 250: 93 minuty
- SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260/300: 100 minut
- SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™ 300: >480 minut
Do zastosowań w laboratoriach biologii molekularnej polecamy ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250, które wydają się oferować najlepszy stosunek jakości do ceny.
technologii SHIELDskin CHEM™ ™ SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260technika ecoSHIELD™ zanurzania Rękawice SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™, SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260 /300 i ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250 są produkowane w twinSHIELD™ tworzydwuwarstwowe. Dzięki twinSHIELD™ rękawice te osiągają wskaźnik AQL na poziomie 0,25, co stanowi najwyższy poziom ochrony na rynku i zapewnia większe bezpieczeństwo operatora. Aby dowiedzieć się więcej o znaczeniu wskaźnika AQL w rękawicach laboratoryjnych, poświęć kilka minut na przeczytanie naszego artykułu.
Nie podejmuj żadnego ryzyka podczas ekstrakcji RNA – noś rękawice odpowiednie do pracy z odczynnikami. Zapoznaj się z naszym poradnikiem doboru rękawic i poradnikiem dotyczącym odporności chemicznej lub skontaktuj się z SHIELD Scientific przedstawicielem handlowym aby dokonać świadomego wyboru.
Podziel się tą ciekawą informacją
