CONTROL DE LA CONTAMINACIÓN POR ENDOTOXINAS EN GUANTES ESTÉRILES PARA SALAS LIMPIAS
Los productos farmacéuticos inyectables o los dispositivos médicos implantables contaminados con endotoxinas pueden provocar una reacción muy grave en el paciente.
La contaminación por endotoxinas de lotes de soluciones inyectables o implantes también puede tener consecuencias financieras importantes para el fabricante.
Por lo tanto, el monitoreo de la contaminación por endotoxinas en guantes de nitrilo y látex estériles para salas blancas es una preocupación clave para entornos críticos, incluida la industria de dispositivos médicos implantables y la industria farmacéutica.
¿Qué son las endotoxinas bacterianas y su impacto?
¿Qué son las endotoxinas bacterianas?
Las endotoxinas, también conocidas como lipopolisacáridos (LPS), son componentes de la membrana externa de las bacterias Gram negativas. Algunos ejemplos de bacterias Gram negativas son E. coli, Salmonella, Legionella y Neisseria.
Figura 1 – Pared celular de bacterias Gram positivas y Gram negativas
Las bacterias gramnegativas están ampliamente presentes en el medio ambiente, incluidos los sistemas de agua y el tracto digestivo. Las endotoxinas pueden liberarse cuando estas bacterias se descomponen o lisan, y pueden permanecer presentes incluso cuando las bacterias ya no son viables.
¿Cuáles son las consecuencias de la contaminación por endotoxinas?
Las endotoxinas bacterianas pueden activar el sistema inmunitario humano y animal y desencadenar una respuesta inflamatoria. Dependiendo del nivel de exposición, esta respuesta puede variar desde fiebre hasta reacciones sistémicas más graves.
La fiebre es una de las respuestas características a la exposición a endotoxinas. Por ello, las endotoxinas bacterianas se clasifican como pirógenos, sustancias que pueden provocar un aumento de la temperatura corporal.
Cuando las endotoxinas ingresan al torrente sanguíneo, una alta exposición puede desencadenar respuestas inflamatorias sistémicas graves. Por ello, el control de endotoxinas es especialmente importante para los fármacos inyectables y otros productos destinados a entrar en contacto con la sangre.
En entornos críticos como el de la industria farmacéutica, la monitorización de endotoxinas es fundamental. Esto es especialmente importante en la producción de agua de grado farmacéutico, medicamentos parenterales e inyectables, incluidos los fluidos para infusión y diálisis, y dispositivos médicos implantables.
Reducción de los niveles de endotoxinas en los guantes de sala limpia
Se sabe que las endotoxinas son la fuente más común de pirógenos en productos farmacéuticos y dispositivos médicos.
Las endotoxinas son residuos de membrana de bacterias gramnegativas, ampliamente presentes en el medio ambiente. Además, las endotoxinas son altamente resistentes a los procesos de desinfección o esterilización, incluida la irradiación gamma.
Por ello, es importante limitar al máximo la carga microbiana de los guantes de nitrilo y látex antes de la esterilización.
La carga microbiana es la población de microorganismos viables presentes en o sobre un producto. Las posibles fuentes de carga microbiana durante la fabricación de guantes incluyen:
- Materias primas y agua de proceso utilizadas durante la fabricación.
- Operadores involucrados en el proceso de fabricación.
- Operaciones de limpieza y empaquetado de guantes.
La carga microbiana de los guantes estériles SHIELD Scientific es analizada por un laboratorio externo independiente de acuerdo con la norma ISO 11737-1 como parte del proceso de control de calidad SHIELD Scientific .
Por lo tanto, para aplicaciones críticas, tanto la esterilidad como el control de endotoxinas deben tenerse en cuenta al seleccionar materiales y equipos de protección que podrían contribuir a la contaminación del producto.
Esterilidad: En el caso de guantes esterilizados por radiación, el proceso de esterilización debe validarse para alcanzar el Nivel de Garantía de Esterilidad (SAL) especificado. La norma ISO 11137-2 define los métodos para establecer la dosis de esterilización necesaria para alcanzar un SAL de 10⁻⁶.
Figura 2 – Bolsa de PE para guantes estériles SHIELDskin XTREME™ con indicador de esterilización
Control de endotoxinas: La esterilización y el control de endotoxinas no son lo mismo. La esterilización tiene como objetivo controlar los microorganismos viables, mientras que las endotoxinas bacterianas pueden persistir incluso después de que los microorganismos ya no sean viables. Por lo tanto, es importante controlar la carga microbiana y los niveles de endotoxinas durante todo el proceso de fabricación de guantes, incluyendo un lavado adecuado y controles de limpieza previos a la esterilización.
¿Por qué es importante controlar los niveles de endotoxinas en los guantes estériles de sala limpia?
La esterilidad y los bajos niveles de endotoxinas son dos aspectos distintos del control de la contaminación. Un guante estéril ha sido sometido a un proceso de esterilización validado para controlar los microorganismos viables, pero esto no garantiza necesariamente un bajo nivel de endotoxinas.
Por lo tanto, para los fabricantes de productos farmacéuticos y de dispositivos médicos implantables, la contaminación por endotoxinas debe tenerse en cuenta a lo largo de todo el proceso de producción, desde las materias primas hasta los productos terminados, incluido el equipo de protección que utilizan los operarios de las salas blancas.
De hecho, la mano enguantada puede estar en contacto directo con soluciones inyectables o sus envases, así como con dispositivos médicos implantables. Por lo tanto, los guantes son una fuente potencial de contaminación.
Figura 3 – Operador cambiando la aguja de una máquina de llenado mientras usa dos pares (doble guante) de guantes estériles SHIELD Scientific
Los guantes desechables estándar de nitrilo y látex reciben un tratamiento mínimo tras completar los pasos de inmersión y secado. Por lo tanto, su nivel de limpieza puede no ser adecuado para aplicaciones en salas blancas. La contaminación con bacterias gramnegativas antes de la esterilización puede contribuir a la presencia de endotoxinas residuales. Incluso en el caso de guantes estériles para salas blancas, la esterilidad por sí sola no proporciona información sobre el nivel de endotoxinas.
Además, las partículas pueden actuar como potenciales portadoras de endotoxinas. Por lo tanto, seleccionar guantes para salas blancas con niveles bajos y controlados de partículas puede ayudar a reducir el riesgo de transferencia de endotoxinas asociadas a partículas y respaldar la estrategia general de control de la contaminación.
Por lo tanto, seleccionar guantes estériles para salas blancas con un bajo contenido de endotoxinas (≤20 UE por par, según la definición de la norma EN 455-3:2023) puede contribuir al control de la contaminación por endotoxinas. Las pruebas por lotes proporcionan información adicional específica sobre los niveles de endotoxinas de cada lote.
¿Cómo se controla el nivel de endotoxinas en los guantes estériles de sala limpia?
Marco regulatorio para la contaminación por endotoxinas de guantes estériles
El Anexo 1 de las Buenas Prácticas de Fabricación ( BPF) de la Unión Europea es uno de los principales documentos que rigen la fabricación y el control de medicamentos. Este documento proporciona directrices para la fabricación de medicamentos estériles basadas en los principios de Gestión de Riesgos de Calidad (GRC), con el objetivo de prevenir la contaminación microbiana, por partículas y por endotoxinas/pirógenos del producto final. Asimismo, exige a los fabricantes que implementen una Estrategia de Control de la Contaminación (ECC) para identificar los puntos críticos de control y evaluar la eficacia de las medidas de control de la contaminación. Como parte de este enfoque basado en el riesgo, se debe considerar el uso de guantes estériles para salas blancas cuando puedan representar una fuente potencial de contaminación.
La norma EN 455-3:2023 (Guantes médicos de un solo uso – Parte 3: Requisitos y ensayos para la evaluación biológica) especifica los requisitos para la evaluación de endotoxinas bacterianas. Los niveles de endotoxinas se expresan en Unidades de Endotoxina (UE) por par de guantes. Para los guantes estériles etiquetados como de «bajo contenido endotoxinas», el contenido de endotoxinas no debe superar las 20 UE por par. Los ensayos se realizan de acuerdo con los métodos de ensayo de endotoxinas bacterianas de la Farmacopea Europea, Monografía 2.6.14.
Métodos para detectar endotoxinas bacterianas
Las pruebas de endotoxinas bacterianas (BET, por sus siglas en inglés) se han basado tradicionalmente en el lisado de amebocitos de Limulus (LAL, por sus siglas en inglés), un reactivo derivado de los amebocitos del cangrejo herradura. El LAL reacciona en presencia de endotoxinas bacterianas y constituye la base de varios métodos de análisis cualitativos y cuantitativos.
Figura 4 – Cangrejo herradura-Limulus polyphemus
El factor C recombinante (rFC) ofrece una alternativa sin componentes de origen animal para las pruebas de endotoxinas bacterianas. La Farmacopea Europea 2.6.14 revisada introduce el rFC como método G, que entrará en vigor el 1 de enero de 2027.
Métodos de ensayo para determinar los niveles de endotoxinas en guantes estériles
Para determinar el nivel de endotoxinas en guantes estériles, se extrae la superficie exterior de cada par con agua libre de endotoxinas durante 40 a 60 minutos a una temperatura de entre 37 °C y 40 °C. Posteriormente, el extracto se centrifuga para eliminar partículas antes de analizarlo para detectar endotoxinas bacterianas.
Las pruebas tradicionales de endotoxinas bacterianas basadas en LAL incluyen tres técnicas principales:
- Prueba de coagulación en gel: un método cualitativo o semicuantitativo en el que la presencia de endotoxinas produce la formación de un gel.
- Ensayo turbidimétrico cinético: un método cuantitativo que mide los cambios en la turbidez a lo largo del tiempo tras la reacción entre las endotoxinas y el reactivo LAL.
- Prueba cromogénica: método cuantitativo que mide la reacción de color generada en respuesta a las endotoxinas.
El resultado de la prueba se expresa en Unidades de Endotoxina (UE) por par de guantes. Según la norma EN 455-3:2023, los guantes estériles etiquetados como de «bajo contenido de endotoxinas» no deben superar las 20 UE por par.
Guantes estériles SHIELD Scientific con bajo contenido de endotoxinas para entornos críticos
En la fabricación de productos farmacéuticos, la producción de dispositivos médicos implantables y otros entornos críticos, la selección de guantes estériles para salas blancas con niveles bajos de endotoxinas especificados puede ayudar a reducir el riesgo de contaminación por endotoxinas.
Por lo tanto, la selección de guantes debe considerarse como parte de la estrategia general de control de la contaminación (CCS) y del enfoque de gestión de riesgos de calidad (QRM), junto con otras medidas utilizadas para controlar la contaminación microbiana, por partículas y por endotoxinas/pirógenos.
SHIELD Scientific ha desarrollado una gama de guantes para salas blancas de nitrilo y látex con diferentes niveles de limpieza, logrados mediante procesos de lavado con agua desionizada. La clasificación DI ayuda a identificar estos diferentes niveles de limpieza de los guantes:
DI – Control básico de contaminación: Guantes para salas blancas con un solo lavado con agua desionizada, con una especificación de nivel de partículas de
DI+ – Alto control de la contaminación: Guantes para salas blancas con tres lavados de agua desionizada, con una especificación de nivel de partículas de
DI++ – Control extremo de la contaminación: Guantes para salas blancas con múltiples lavados con agua desionizada, con una especificación de nivel de partículas de
SHIELDskin XTREME™ Los guantes estériles para salas blancas están diseñados para apoyar el control de la contaminación en entornos críticos, incluidos los entornos de fabricación farmacéutica que operan bajo los requisitos GMP. SHIELD Scientific se prueban por lotes para detectar endotoxinas, con un nivel de endotoxina especificado.
Cada lote de guantes estériles de nitrilo y látex para salas blancas SHIELD Scientific incluye un Certificado de Irradiación (CoI). Un Certificado de Conformidad (CoC) proporciona datos específicos del lote sobre los niveles de partículas y endotoxinas, lo que respalda la documentación de la limpieza de los guantes y el control de la contaminación.
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No. Un guante estéril para salas blancas no necesariamente tiene un bajo nivel de endotoxinas. La esterilización tiene como objetivo controlar los microorganismos viables, pero las endotoxinas bacterianas pueden permanecer incluso cuando los microorganismos ya no son viables. Por lo tanto, la esterilidad y los niveles de endotoxinas son dos aspectos distintos del control de la contaminación. Cuando se requieren niveles bajos de endotoxinas, estos deben estar respaldados por un límite de endotoxinas especificado y las pruebas adecuadas. Según la norma EN 455-3:2023, los guantes estériles etiquetados como de «bajo contenido de endotoxinas» no deben superar las 20 UE por par.
En el caso de los guantes estériles, el término «bajo contenido de endotoxinas» se refiere a un nivel controlado y comprobado de endotoxinas bacterianas. Los niveles de endotoxinas se pueden determinar mediante el método de ensayo descrito en la norma EN 455-3:2023 y se expresan en Unidades de Endotoxina (UE) por par de guantes. La norma EN 455-3:2023 establece unlímite de 20 UE por par para la declaración de «bajo contenido de endotoxinas» dentro del alcance de la norma. Un bajo contenido de endotoxinas es distinto de la esterilidad y, por lo tanto, debe comprobarse específicamente cuando sea necesario controlar la contaminación por endotoxinas.
La medición de endotoxinas bacterianas en guantes estériles para salas blancas consta de dos etapas clave: la recuperación de la posible contaminación por endotoxinas de la superficie del guante y su medición mediante una prueba adecuada. Se utiliza agua libre de endotoxinas para recoger las que puedan estar presentes en el guante, de modo que la muestra resultante pueda analizarse. La detección puede realizarse mediante ensayos establecidos de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) o tecnología de factor C recombinante (rFC). El resultado proporciona una medida cuantitativa del nivel de endotoxinas y se expresa en unidades de endotoxinas por par de guantes (UE/par), lo que permite evaluar diferentes especificaciones de guantes de forma consistente.
La limpieza de partículas y los niveles de endotoxinas describen diferentes aspectos del perfil de contaminación de un guante estéril para salas blancas y deben evaluarse por separado. Estos parámetros no deben considerarse intercambiables: los niveles de partículas caracterizan la limpieza de partículas, mientras que la prueba de endotoxinas aborda la contaminación bacteriana por endotoxinas. Es importante destacar que un nivel bajo de partículas no permite predecir un nivel bajo de endotoxinas. Por lo tanto, evaluar ambas especificaciones proporciona un perfil de contaminación más completo al seleccionar guantes estériles para salas blancas en aplicaciones críticas.
Para aplicaciones sensibles a las endotoxinas, el punto de partida debe ser un nivel de endotoxinas claramente especificado y probado para el guante estéril de sala limpia. Esta especificación debe considerarse en relación con los riesgos de contaminación y los requisitos de limpieza del proceso real, en lugar de basarse únicamente en la esterilidad o la clasificación de sala limpia. La documentación de respaldo debe proporcionar datos de prueba sobre las características de limpieza pertinentes, lo que permite a los usuarios verificar la especificación de endotoxinas del guante y evaluar su idoneidad para la aplicación prevista en la sala limpia.
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Preguntas frecuentes
¿Busca información sobre guantes para salas blancas o laboratorios? Esta sección de preguntas frecuentes abarca temas clave como el uso de guantes desechables, el control de la contaminación, la protección de las manos y la selección de guantes. Consulte la guía práctica o póngase en contacto con SHIELD Scientific para encontrar la solución más adecuada para su Sala limpia o laboratorio.
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