Que tipo de luvas descartáveis você deve usar durante a extração de RNA com TRIzol®?
O RNA desempenha um papel crucial na expressão gênica, servindo como intermediário entre o DNA e as proteínas. A extração de DNA, RNA e proteínas é uma etapa fundamental no estudo da genética molecular. O uso de Equipamentos de Proteção Individual (EPI) adequados durante a extração de RNA é essencial para evitar a contaminação por RNase, que poderia distorcer os resultados. Além disso, os métodos de extração frequentemente requerem o uso de solventes orgânicos. Dependendo do método de extração utilizado, a seleção das luvas de laboratório corretas é vital, especificamente luvas que ofereçam a melhor resistência aos produtos químicos manipulados. Por isso, é tão importante selecionar cuidadosamente as luvas descartáveis que você usa durante a extração de RNA com TRIzol® ou reagentes similares.
Qual é o método de extração de RNA mais utilizado?
O método de extração com tiocianato de guanidina-fenol-clorofórmio é amplamente utilizado em biologia molecular para isolar RNA (e ocasionalmente DNA e proteínas) de diversas amostras (tecidos humanos/animais; plantas; leveduras; bactérias).
Desde a publicação do método de Chomczynski-Sacchi em 1987 (Fonte: Chomczynski – Sacchi – 1987. “Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.” https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2440339/ ), este se tornou o método de referência. Embora existam inúmeros métodos alternativos atualmente, como kits de extração, muitos usuários ainda preferem este método manual.
Diversas empresas comercializam reagentes para esse processo de extração sob vários nomes comerciais, como TRIzol® (Invitrogen), TRI Reagent® (Molecular Research Center), QIAzol® (Qiagen), NucleoZOL (Macherey-Nagel), RNA Extracol (Eurx) e outros.
O protocolo de extração com tiocianato de guanidina-fenol-clorofórmio permite a dissolução simultânea de proteínas, lipídios e ácidos nucleicos, mantendo a integridade do RNA. A principal vantagem desse método é a capacidade de isolar simultaneamente RNA, DNA e proteínas da mesma amostra, simplesmente ajustando a fase de recuperação. No entanto, o principal desafio reside no manuseio dos reagentes tóxicos e voláteis envolvidos no processo.
Quais são os riscos dos reagentes utilizados para a extração de RNA?
Neste artigo, referimo-nos especificamente ao "TRIzol®" — a solução comercial utilizada nos nossos testes de resistência química em luvas de laboratório (permeação química).
Todos esses reagentes consistem em uma mistura de fenol (solvente) e tiocianato de guanidínio (agente caotrópico).
Esses reagentes apresentam diversos avisos e símbolos de perigo, de acordo com o Regulamento (CE) n.º 1272/2008 relativo à “classificação, rotulagem e embalagem” (Regulamento CLP) de substâncias e misturas:
A composição desses reagentes inclui:
- Fenol: Um composto altamente corrosivo para a pele e os olhos, tóxico por inalação, ingestão e contato com a pele. Pode causar queimaduras e ferimentos graves.
- Tiocianato de guanidínio: Corrosivo para a pele e os olhos, tóxico por inalação, ingestão e contato com a pele, podendo causar irritações e queimaduras.
Ao manusear esses reagentes sob uma capela de exaustão para evitar a exposição a vapores tóxicos, os usuários ficam expostos a riscos químicos, principalmente por contato com a pele.
Os operadores de laboratório normalmente manuseiam as embalagens comerciais (100–200 ml), o que acarreta risco de derramamento acidental. Durante a fase de processamento das amostras, os operadores também ficam expostos ao TRIzol® (micropipetagem, agitação das amostras em vórtex, abertura/fechamento de microtubos, trituração das amostras, etc.).
Portanto, é crucial garantir o uso de Equipamentos de Proteção Individual (EPI) adequados, como de laboratório , ao manusear esses produtos químicos..
Quais luvas descartáveis são adequadas para manusear reagentes de extração de RNA?
Devido aos produtos químicos envolvidos, o uso de luvas descartáveis adequadas é de extrema importância. Os operadores devem avaliar se as luvas que normalmente usam para essas tarefas são adequadas para o manuseio desses reagentes.
Deve-se dar prioridade às luvas descartáveis de nitrilo ou nitrilo/neoprene em vez de luvas de látex de borracha natural. As luvas de nitrilo são, de fato, mais resistentes a solventes orgânicos.
As SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™, SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260 e SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 300, e ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250 são particularmente adequadas para proteção contra respingos durante o manuseio de reagentes de extração de RNA.
Os testes de permeação química com TRIzol® nessas luvas produziram os seguintes resultados:
- ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF 250: 93 minutos
- SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260260/300: 100 minutos
- SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™ 300: >480 minutos
Para uso em laboratórios de biologia molecular, recomendamos a ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250, que parece oferecer o melhor equilíbrio entre proteção e custo.
As SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™, SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260e ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250 são todas fabricadas com twinSHIELD™ a tecnologia. Essa técnica de dupla imersão cria uma luva de camada dupla. Graças à twinSHIELD™ tecnologia AQL de 0,25, o nível de proteção mais alto do mercado, proporcionando maior segurança ao operador. Para saber mais sobre a importância do AQL em luvas de laboratório, leia nosso artigo dedicado ao tema.
Não corra riscos durante suas extrações de RNA – use luvas adequadas para o manuseio de reagentes. Consulte nosso guia de seleção de luvas e o Guia de Resistência Química ou entre em contato com seu SHIELD Scientific representante de vendas para fazer a escolha certa.
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