エンドトキシンに汚染された注射用医薬品や埋め込み型医療機器は、患者に非常に重篤な反応を引き起こす可能性があります。.

注射液やインプラントのバッチにおけるエンドトキシン汚染も、製造業者に重大な経済的影響を及ぼす可能性があります。.

したがって、滅菌クリーンルームのニトリル手袋とラテックス手袋のエンドトキシン汚染を監視することは、インプラント医療機器業界や製薬業界などの重要な環境にとって重要な懸念事項です。.

 

細菌性エンドトキシンとその影響とは何ですか?

細菌エンドトキシンとは何ですか?

エンドトキシンまたはリポ多糖類（LPS）は、 グラム陰性細菌の外膜から抽出される断片 （グラム染色法を用いると、グラム陰性細菌はピンク色に、グラム陽性細菌は紫色に染まります）。グラム陰性細菌の例としては、大腸菌、サルモネラ菌、レジオネラ菌、ナイセリア菌などが挙げられます。

 

図1 – グラム陽性細菌とグラム陰性細菌の細胞壁

 

グラム陰性菌は 環境中のあらゆる場所 （水、暖房システム、消化管、糞便など）に ため、エンドトキシンが存在すると非常に高いリスクが生じる可能性があります。 エンドトキシン分子は、細胞溶解（物理的、化学的、または生物学的因子の作用による細胞膜の破壊）の際に放出されます。

エンドトキシン汚染の結果は何ですか?

エンドトキシンの生物学的構成は、ヒトおよび動物の免疫系に影響を及ぼし、アレルギー反応を引き起こす可能性があります。その結果、比較的強い炎症反応を引き起こす可能性があります。また、体力が弱っている（免疫不全状態）、幼児（早産児）、または高齢の患者においては、重篤な感染症を引き起こす可能性があります。.

最も一般的な反応は発熱です。そのため、グラム陰性エンドトキシンは「発熱物質」 、つまり免疫系を活性化させて体温上昇を引き起こす分子と考えられています。

エンドトキシンは、吸入すると急性呼吸窮迫症候群（ARDS）を引き起こす可能性があります。注射によって体内に侵入したエンドトキシンは、播種性血管内凝固症候群（DIC）を引き起こし、多量が血流に到達すると敗血症性ショックを引き起こすこともあります。.

製薬業界のような重要な環境では、エンドトキシンモニタリングが不可欠です。これは特に、医薬品グレードの水（精製水）の製造、非経口薬・注射剤（輸液、透析液など）、そしてインプラント型医療機器の製造において重要です。.

 

クリーンルーム用手袋のエンドトキシン濃度を低減

エンドトキシンは、医薬品や医療機器における発熱物質の最も一般的な発生源として知られています。.

エンドトキシンはグラム陰性細菌の膜残基です。グラム陰性細菌は環境中に生存し、多数存在します。さらに、 エンドトキシンはガンマ線照射を含む消毒・滅菌プロセスに対して高い耐性を示します。

このため、滅菌前にニトリル手袋とラテックス手袋のバイオバーデンを可能な限り制限する必要があります。.

バイオバーデンとは、表面または機器内に存在するあらゆる種類の生菌の濃度を指します。このバイオバーデンは主に以下の要因によって生じます。

• 製造工程で使用される原材料（医薬品グレードの水を含む）。.
• 製造工程に関わるオペレーター。.
• 製造された製品の洗浄および梱包作業。.

SHIELD Scientific 滅菌手袋における微生物汚染の検出と定量化は、外部機関によってISO 11737-1に準拠して実施されています。これは SHIELD Scientificの品質管理プロセスの基本的な部分です。.

したがって、医薬品や埋め込み型医療機器の製造に使用されるすべての原材料、包装、保護具は、 無菌性だけでなく発熱性に関する健康要件にも準拠する必要があります。

滅菌性： 滅菌保証レベル（SAL）10⁻⁶（欧州薬局方の要件に準拠）を確保するため、手袋はISO 11137-2:2015（医療製品の滅菌－放射線－第2部：滅菌線量の決定）に従って微生物学的検証を受けなければなりません。

 

図2 – SHIELDskin XTREME™ 滅菌手袋 PEバッグ（滅菌インジケータ付き）

非発熱性: 脱発熱性はさまざまな方法で行うことができます。

• 注射用水（WFI）または脱イオン水などの高品質の水で洗浄する。.
• 高温にさらすことによる乾熱処理。.
• 圧力と過酸化水素の組み合わせによる湿潤熱処理（警告：オートクレーブではエンドトキシンが破壊されません）。.
• 分子量に応じてエンドトキシンの超濾過。.
• エチレンオキシドによる分解。.

 

滅菌クリーンルーム用手袋のエンドトキシンレベルを制御することが重要なのはなぜですか?

無菌性要件（生きた微生物が存在しない）と発熱性（エンドトキシンなどの発熱性分子が存在しない）は、多くの医薬品および埋め込み型医療機器メーカーにとって最も重要です。.

エンドトキシンに関連するリスクを可能な限り制限するために、クリーンルーム作業者の保護具を含め、原材料から完成品までの製造プロセス全体にわたって汚染を制御する必要があります。

実際、 手袋をはめた手は注射液やその容器、そして埋め込み型医療機器に直接接触する可能性があり、手袋は汚染源となる可能性があります。

 

図3 – SHIELD Scientific 滅菌手袋を二重に着用した作業員が充填機の針を交換する様子

 

標準的なニトリルおよびラテックス製の使い捨て手袋は、浸漬および乾燥工程を終えた後、最小限の処理しか施されていません。そのため、手袋の清浄度はクリーンルームでの使用には適さない可能性があります。また、手袋にはグラム陰性菌が大量に付着している可能性があることにも留意してください。通常は塩素処理され、精製水で洗浄される滅菌済みのクリーンルーム用手袋であっても、エンドトキシンレベルに関しては保証されない場合が多くあります。.

さらに、粒子はエンドトキシンを伝染させる可能性があるため、「低レベル保証」の粒子を含む手袋を選択すると、汚染制御戦略の強化に役立ちます。.

したがって、エンドトキシン含有量が低いとされる手袋（EN 455-3:2015 の定義で 20 EU/組未満）を選択し、さらにはエンドトキシンについてバッチテスト済みの手袋を選択することが、解決策となる可能性があります。.

 

滅菌クリーンルーム用手袋のエンドトキシンレベルはどのように監視されますか?

滅菌手袋のエンドトキシン汚染に関する規制枠組み

欧州連合のGMP（ 医薬品製造管理基準）の附属書1は、医薬品の製造および管理を規定する主要文書の一つです。この文書は、品質リスク管理（QRM）に関するガイドラインを提供しています。特に、新しいGMPの附属書1では、最終製品の微生物汚染、微粒子汚染、エンドトキシン／発熱性物質汚染を回避しなければならないと規定されています。 そのため、滅菌済みのクリーンルーム用手袋を品質リスク管理（QRM）に組み込む必要があります。

EN 455-3:2015 （使い捨て医療用手袋－第3部：生物学的評価のための要求事項及び試験） は、滅菌済み使い捨て手袋の製造業者に対し、手袋のエンドトキシン汚染を管理することを義務付けている。 試験方法は、欧州薬局方モノグラフ2.6.14の要求事項に準拠しなければならない。

エンドトキシンを検出するカブトガニ

滅菌済みクリーンルーム用手袋に付着した細菌性エンドトキシンのレベルを測定する最も広く使用され、認知されている方法は、 リムルスアメボサイトライセート（LAL）を用いる方法である。

カブトガニは青い血液（無脊椎動物の場合はむしろ血リンパ）を持つという特徴を持つ、祖先の海洋節足動物です。.

 

図4 – カブトガニ（Limulus polyphemus）

 

この血リンパには卵形のアメーボサイト細胞が含まれており、エンドトキシンの存在下ではこの形状が崩れ、凝血塊を形成します。 カブトガニの血液のこの凝固は、様々なエンドトキシン測定試験法の基礎となっています。

滅菌手袋のエンドトキシン汚染の検査方法

まず、手袋の外側の表面を、エンドトキシンフリー水（欧州薬局方準拠のLAL水）40～50mlで、37℃～40℃の温度で40～60分間抽出します。その後、必要に応じて、抽出液を遠心分離（2,000g、15分間）し、粒子を除去します。その後、デカンテーションを行い、直ちにエンドトキシン試験を行います。.

Limulus Amebocyte Lysate を使用した細菌エンドトキシン試験法は主に 3 つあります。

• ゲル凝固試験 （「定性」試験＝エンドトキシンの存在は検出できるが、量を正確に決定することはできない）：抽出液とLAL剤を混合した後のゲル（「凝固物」）の形成。
• 動的濁度測定試験 （「定量的」試験＝エンドトキシンの存在を検出し、その量を決定できる）：LAL試薬との混合後の濁度の発生。
• 発色試験 （「定量的」試験＝エンドトキシンの存在を検出し、その量を判定できる）：LAL試薬と混合した後に発色する。

試験結果は、手袋 1 組あたりのエンドトキシン単位 (EU) で報告されます。.

EN 455-3:2015では、 「低エンドトキシン含有量」と表示されるためには、手袋1組あたりのエンドトキシン含有量が20 EU以下でなければならないと規定されている。

 

SHIELD Scientific 低エンドトキシン滅菌手袋（重要環境向け）

患者の合併症のリスクを抑えるために、エンドトキシン含有量の少ない高品質の滅菌手袋を使用するように注意する必要があります。.

の一環として 、手袋の選択とそれが重要な環境にどのように適用されるかについて考えると役立つ場合があります。

そのため、 SHIELD Scientific 、脱イオン水での洗浄量に応じて清浄度が異なるニトリルおよびラテックス製のクリーンルーム用手袋を開発しました。この使い捨て手袋は、シンプルな分類で分類できます。

DI:基本的な汚染管理と粒子レベルの仕様が 3,000 個/cm² > 0.5μm 未満であるために、脱イオン水で 1 回洗浄した手袋。 DI+ :高度な汚染管理と粒子レベルの仕様が1,200 個/cm² > 0.5μm 未満であるために、脱イオン水で 3 回洗浄した手袋。 DI++ :極めて高度な汚染管理と粒子レベルの仕様が 850 個/cm² > 0.5μm 未満であるために、脱イオン水で複数回洗浄した手袋。

SHIELDskin XTREME™ ブランドの滅菌手袋はすべて、GMP（医薬品製造管理基準）に準拠して作業する作業者が求める品質基準を満たし、汚染リスクを低減するように設計されています。SHIELD すべて SHIELD Scientific 、バッチテストを実施し、手袋1組あたり20 UE（エンドトキシン単位）未満の低エンドトキシン含有量と、10⁻⁶の滅菌保証レベル（SAL）（ガンマ線照射滅菌による）を実証しています。クリーンルーム用ニトリル製およびラテックス製滅菌手袋は

SHIELD Scientific 滅菌ニトリルおよびラテックス製クリーンルーム用手袋には、各バッチごとに照射証明書（CoI）が発行されます。適合証明書（CoC）には、バッチごとの粒子およびエンドトキシン濃度に関するデータが記載されています。.

 

重要な環境ではエンドトキシン汚染の制御が不可欠であるため、サンプルを注文したり、者にアドバイスを求め SHIELD Scientific ティフィックの営業担当たりするのにこれ以上待つ必要はありません。