TRIzol® का उपयोग करके RNA निकालने के दौरान आपको किस प्रकार के एकल-उपयोग वाले दस्ताने पहनने चाहिए?
जीन अभिव्यक्ति में RNA एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जो DNA और प्रोटीन के बीच मध्यस्थ का काम करता है। DNA, RNA और प्रोटीन का निष्कर्षण आणविक आनुवंशिकी के अध्ययन का एक प्रमुख चरण है। RNA निष्कर्षण के दौरान उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (PPE) पहनना आवश्यक है ताकि RNase से संदूषण से बचा जा सके, जो परिणामों को विकृत कर सकता है। इसके अलावा, निष्कर्षण विधियों में अक्सर कार्बनिक विलायकों का उपयोग आवश्यक होता है। उपयोग की जाने वाली निष्कर्षण विधि के आधार पर, सही प्रयोगशाला दस्तानों का चयन महत्वपूर्ण है, विशेष रूप से ऐसे दस्ताने जो उपयोग किए जा रहे रसायनों के प्रति सर्वोत्तम प्रतिरोध प्रदान करते हों। यही कारण है कि TRIzol® या इसी तरह के अभिकर्मकों के साथ RNA निष्कर्षण के दौरान पहने जाने वाले एकल-उपयोग वाले दस्तानों का सावधानीपूर्वक चयन करना बहुत महत्वपूर्ण है।
आरएनए निकालने की सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली विधि कौन सी है?
गुआनिडिनियम थायोसाइनेट-फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि का उपयोग आणविक जीव विज्ञान में विभिन्न नमूनों (मानव/पशु ऊतक; पौधे; खमीर; जीवाणु) से आरएनए (और कभी-कभी डीएनए और प्रोटीन) को isoकरने के लिए व्यापक रूप से किया जाता है।.
1987 में चोमज़िंस्की-साची विधि के प्रकाशन के बाद से (स्रोत: चोमज़िंस्की-साची-1987. " isoएसिड गुआनिडिनियम थायोसाइनेट-फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण द्वारा आरएनए पृथक्करण की एकल-चरणीय विधि।" ) , यह मानक विधि बन गई है। हालांकि आज निष्कर्षण किट जैसे कई वैकल्पिक तरीके मौजूद हैं, फिर भी कई उपयोगकर्ता इस मैनुअल विधि को ही प्राथमिकता देते हैं।
कई कंपनियां इस निष्कर्षण प्रक्रिया के लिए अभिकर्मकों का विपणन विभिन्न वाणिज्यिक नामों के तहत करती हैं, जैसे कि TRIzol® (Invitrogen), TRI Reagent® (Molecular Research Center), QIAzol® (Qiagen), NucleoZOL (Macherey-Nagel), RNA Extracol (Eurx), और अन्य।.
गुआनिडिनियम थायोसाइनेट-फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण प्रोटोकॉल आरएनए की अखंडता को बनाए रखते हुए प्रोटीन, लिपिड और न्यूक्लिक एसिड को एक साथ घोलने की अनुमति देता है। इस विधि का मुख्य लाभ यह है कि यह isoपुनर्प्राप्ति चरण को समायोजित करके एक ही नमूने से आरएनए, डीएनए और प्रोटीन को एक साथ अलग कर सकता है। , मुख्य चुनौती इस प्रक्रिया में शामिल विषैले और वाष्पशील अभिकर्मकों को संभालने में निहित है।
आरएनए निष्कर्षण के लिए उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों के क्या खतरे हैं?
इस लेख में, हम विशेष रूप से "TRIzol®" का उल्लेख करते हैं - यह एक व्यावसायिक घोल है जिसका उपयोग प्रयोगशाला के दस्तानों पर हमारे रासायनिक प्रतिरोध परीक्षणों (रासायनिक पारगम्यता) में किया जाता है।.
इन सभी अभिकर्मकों में फिनोल (विलायक) और गुआनिडिनियम थायोसाइनेट (चायोट्रोपिक एजेंट) का मिश्रण होता है।.
पदार्थों और मिश्रणों के वर्गीकरण, लेबलिंग और पैकेजिंग (सीएलपी विनियमन) संबंधी विनियमन (ईसी) संख्या 1272/2008 के अनुसार इन अभिकर्मकों पर विभिन्न खतरे की चेतावनियाँ और प्रतीक अंकित होते हैं।
इन अभिकर्मकों की संरचना में निम्नलिखित शामिल हैं:
- फिनोल: त्वचा और आंखों के लिए एक अत्यंत संक्षारक यौगिक है, जो साँस लेने, निगलने और त्वचा के संपर्क में आने पर विषैला हो जाता है। इससे गंभीर जलन और चोटें लग सकती हैं।
- गुआनिडिनियम थायोसाइनेट: त्वचा और आंखों के लिए संक्षारक, साँस लेने, निगलने और त्वचा के संपर्क में आने पर विषाक्त, और जलन और घाव पैदा कर सकता है।
विषाक्त वाष्पों के संपर्क से बचने के लिए फ्यूम हुड के नीचे इन अभिकर्मकों को संभालते समय, उपयोगकर्ताओं को रासायनिक जोखिमों, विशेष रूप से त्वचा के संपर्क के माध्यम से।
प्रयोगशाला संचालक आमतौर पर व्यावसायिक पैकेजिंग (100-200 मिलीलीटर) को संभालते हैं, जिसके दौरान आकस्मिक रिसाव का खतरा। नमूना प्रसंस्करण चरण के दौरान, संचालक TRIzol® के संपर्क में भी आते हैं (माइक्रोपिपेटिंग, नमूनों को वर्टेक्स करना, माइक्रोट्यूब खोलना/बंद करना, नमूना पीसना आदि)।
जैसे उपयुक्त व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) का उपयोग सुनिश्चित करना अत्यंत महत्वपूर्ण है। प्रयोगशाला इन रसायनों को संभालते समय.
आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मकों को संभालने के लिए कौन से डिस्पोजेबल दस्ताने उपयुक्त हैं?
इसमें शामिल रसायनों को देखते हुए, उपयुक्त डिस्पोजेबल दस्ताने पहनना अत्यंत महत्वपूर्ण है। संचालकों को यह जांच करनी चाहिए कि क्या वे दस्ताने जो वे आमतौर पर इन कार्यों के लिए पहनते हैं, इन अभिकर्मकों को संभालने के लिए उपयुक्त हैं।.
प्राकृतिक रबर लेटेक्स दस्तानों की बजाय एकल-उपयोग वाले नाइट्राइल या नाइट्राइल/नियोप्रीन दस्तानों को प्राथमिकता दी जानी चाहिए। नाइट्राइल के दस्ताने वास्तव में कार्बनिक विलायकों के प्रति अधिक प्रतिरोधी होते हैं।
SHIELDskin SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™, SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260 और SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 300तथा ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250 दस्ताने RNA निष्कर्षण अभिकर्मकों को संभालते समय छींटों से सुरक्षा के लिए विशेष रूप से उपयुक्त हैं।
रासायनिक पारगम्यता परीक्षणों से निम्नलिखित परिणाम प्राप्त हुए:
- ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF 250: 93 मिनट
- SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260/300: 100 मिनट
- SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™ 300: >480 मिनट
आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोग के लिए, हम ecoSHIELD™ इको नाइट्राइल पीएफ250 दस्ताने की अनुशंसा करते हैं, जो सुरक्षा और लागत के बीच सर्वोत्तम संतुलन प्रदान करता प्रतीत होता है।
SHIELDskin SHIELDskin CHEM™ NEO NITRILE™, SHIELDskin™ ORANGE NITRILE™ 260और ecoSHIELD™ Eco Nitrile PF250 दस्ताने twinSHIELD™ तकनीक। यह डबल-डिपिंग तकनीक दोहरी परत वाले दस्ताने बनाती है। twinSHIELD™ तकनीक के कारण, ये दस्ताने 0.25 का AQL, जो बाजार में सुरक्षा का उच्चतम स्तर है, जिससे ऑपरेटर की सुरक्षा बेहतर होती है। के लिए AQL के महत्व के बारे में अधिक जानने , कृपया हमारा विशेष लेख पढ़ें।
आरएनए निष्कर्षण के दौरान कोई जोखिम न लें – अभिकर्मकों को संभालने के लिए उपयुक्त दस्ताने पहनें। दस्ताने चयन संबंधी हमारी मार्गदर्शिका और रासायनिक प्रतिरोध मार्गदर्शिका या अपने SHIELD Scientific बिक्री प्रतिनिधि से सही चुनाव के लिए
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